Mitochondrial (AMA)-M2-Ak ELISA

Zweckbestimmung

Der Mitochondrial (AMA)-M2-Ab ELISA ist ein Festphasen-Enzymimmunoassay mit hochgereinigtem mitochondialem M2 Antigen zur quantitativen und qualitativen Bestimmung von IgG Antikör-pern gegen M2 in humanem Serum.

Die Bestimmung dieser Antikörper dient der Diagnosestellung der primären biliären Zirrhose (PBC).

Klinische Anwendung und Testprinzip

Die primäre biliäre Zirrhose ist eine chronisch-entzündliche Erkrankung der kleinen und mittleren Gallengänge, die serologisch durch das Auftreten von Autoantikörpern gegen M2- Antigen charakterisiert ist. Anti-M2 Antikörper gehören zu den anti-mitochondrialen Antikörpern (AMA). Sie reagieren heterogen gegen drei verwandte Proteine des α Ketosäure Dehydrogenase-Komplexes, der an der inneren Mitochondrienmembran lokalisiert ist. Die meisten der Antikörper-bindenden Epitope liegen auf der E2 Untereinheit und dem Protein X des Pyruvat-Dehydrogenase Komplexes (PDC). Zusätzlich erkennen AMA-M2-G Antikörper auf dem PDC die (E1α and E1β)- Untereinheit sowie die E2 Untereinheit verschiedener anderer Multienzym-Komplexe wie z.B. dem 2-Oxo-Glutarat Dehydrogenase-Komplex (OGDC) und dem branched chain 2 Oxosäure Dehydrogenase-Komplex (BCOADC).

Die Bestimmung von AMA-M2-G Autoantikörpern ist für die Diagnosestellung der primären biliären Zirrhose von großer Bedeutung.

Testprinzip

Die 1:101 verdünnten Serumproben werden in den Kavitäten, welche mit dem spezifischen Antigen beschichtet sind, inkubiert. Hierbei binden spezifische Antikörper aus dem Patientenserum, wenn vorhanden, an das Antigen auf der Platte; ungebundene Serumkomponenten werden im folgenden Waschschritt weggewaschen. Anschließend werden anti-Human Immunoglobuline, die mit Meerrettich-Peroxidase markiert sind (Konjugat), zugegeben. Während einer Inkubation binden diese an den zuvor gebildeten Antigen-Antikörper-Komplex, nicht gebundene Immunglobuline werden im folgenden Waschschritt entfernt. Der Nachweis gebundener Antikörper erfolgt mit einer enzymatischen Farbreaktion (blau) des Substrates, die mit verdünnter Säure abgestoppt wird (Farb-umschlag nach gelb). Die Intensität der Farbentwicklung des Chromogens ist abhängig von der an den Antigen-Antikörper-Komplex gebundenen Konjugatmenge und somit direkt proportional zur Antikörperkonzentration im Serum.