Insulin ELISA

Der Insulin ELISA

ist ein Festphasen-Enzymimmunoassay, der auf der Sandwichtechnik basiert. Die Wells der Mikrotiterplatten sind mit einem monoklonalen Antikörper beschichtet, der gegen eine definierte Antikörper-Bindungsstelle des Insulin -Moleküls gerichtet ist. Die Proben werden in die beschichteten Wells gegeben und mit einem Enzym-Konjugat inkubiert. Das Konjugat enthält einen anti-Insulin-Antikörper, der mit Biotin konjugiert ist. Das nicht gebundene Konjugat wird durch Waschen der Wells entfernt. In einer zweiten Inkubation bindet ein Streptavidin-Peroxidase-Enzymkomplex an den biotinylierten anti- Insulin-Antikörper. Nach einem weiteren Waschschritt wird die Substratlösung zugegeben und die Farbentwicklung nach einer definierten Zeit gestoppt. Die Intensität der gebildeten Farbe ist proportional der Insulin-Konzentration in der Probe. Die Extinktion wird bei 450 nm mit einem Mikrotiterplattenleser gemessen.

Das Hormon Insulin ist hauptverantwortlich für die Kontrolle des Glukosestoffwechsels. Es wird als Vorläufer Proinsulin in den β-Zellen der Langerhans’schen Inselzellen synthetisiert und weiter umgewandelt in C-Peptid und Insulin. Beide werden in equimolaren Mengen in die Portalzirkulation abgesondert. Das fertige Insulinmolekül umfasst zwei Polypeptidketten, die A-Kette und die B-Kette (dementsprechend 21 und 30 Aminosäuren). Die beiden Ketten sind miteinander durch zwei intermolekulare Disulfidbrücken verbunden. Die A-Kette enthält zudem selbst eine Disulfidbrücke. Die Insulinausschüttung wird hauptsächlich durch die Glukosekonzentration im Plasma kontrolliert, wobei das Hormon Insulin für eine Reihe wichtiger Stoffwechselvorgänge verantwortlich ist. Seine Hauptfunktion besteht in der Kontrolle der Glukoseaufnahme und -verwendung aus dem peripheren Gewebe durch die Glucosetransporter. Diesen sowie weiteren hypoglykämischen Aktivitäten, wie z.B. der Hemmung der hepatischen Gluconeogenese und Glycogenolyse wird von den hyperglykämischen Hormonen, einschließlich Glucagon, Epinefrin (Adrenalin), Wachstumshormon und Cortisol entgegengewirkt. Die Insulinspiegel sind stark reduziert bei insulin-abhängigem Diabetes mellitus (IDDM) und anderen Erkrankungen wie z.B. Hypophyseninsuffizienz. Bei nicht-insulin-abhängigem Diabetes mellitus (NIDDM), Adipositas, Insulinom und einigen endokrinen Dysfunktionen wie dem Cushing’s Syndrom und Akromegalie sind die Insulinspiegel erhöht.