1,25-Dihydroxy-Vitamin D ELISA

Die LC-Tandem-MS ist unser
Maßstab

Die Bestimmung des physiologisch aktiven Vitamin-D-Metaboliten 1,25-Dihydroxy-Vitamin D ist ein notwendiges Diagnose-Werkzeug bei diversen Erkrankungen, wie z.B.:

• Nierenerkrankungen
• Nierentransplantationen
• Sarkoidose
• Rachitis
• Osteomalazie

Unabdingbar ist daher eine gute Qualität der Messmethode, die unser Assay hundertprozentig erfüllt.

Da die Konzentrationen des 1,25-Dihydroxy-Vitamin D im Plasma oder Serum 100- bis 1.000-fach geringer als die des 25-Hydroxy-Vitamin D sind und es zahlreiche ähnliche Metaboliten gibt, ist es für die genaue Bestimmung des 1,25-Dihydroxy-Vitamin-D weiterhin notwendig einen Extraktions- und Aufreinigungsschritt mit organischen Lösungsmitteln als Probenvorbehandlung durchzuführen. Diese Extraktion mit organischen Lösungsmitteln ist auch heute noch als Goldstandard zu sehen.

"Die stufenweise Aufgabe der Probenextraktion, Chromatographie, […] in Immunassays hat ohne Zweifel zu den Inkonsistenzen beschrieben von Farrell et al. beigetragen, […]."(Graham Carter, DEQAS Organisator, aus dem Englischen übersetzt, Carter GD. Clin Chem. 2012;58(3):486-8.)

Die Extraktion verhindert potentielle Interferenzen von der Probenmatrix, heterophilen Antikörpern und anormalen Konzentrationen des Vitamin-D-bindenden-Proteins. Die weitere Aufreinigung mit Festphasenkartuschen unterdrückt zusätzlich Interferenzen mit anderen Vitamin-D-Metaboliten, wie 25-Hydroxy-Vitamin D, 24,25-Dihydroxy-Vitamin D, 3-epi-25-Hydroxy-Vitamin D und 25,26-Hydroxy-Vitamin D.

All dies führt zu einer guten Korrelation mit der Goldstandard-Messmethode, der LC-Tandem-MS (siehe Abbildung unten).

Korrelation des IBL ELISA mit der LC-MS/MS Methode von Quest Diagnostics (n=11)

Weiterhin wurde der ELISA auch mit dem weitverbreiteten Radioimmunoassay der Firma Diasorin korreliert. Der ELISA zeigt hier ebenfalls eine gute Korrelation.

Korrelation des IBL ELISA mit dem Radioimmunoassay von Diasorin (n=118)

Merkmale unseres ELISAs sind

• Gute Korrelation mit der LC-MS/MS
• Reduzierte Anzahl von Arbeitsschritten
• Sehr niedrige Nachweisgrenze (1,7 pg/mL)
• Exakte Bestimmtung der DEQAS Proben
• 108% Kreuzreaktivität zu 1,25(OH)₂ Vitamin D2
• Goldstandard-Extraktionsmethode um Interferenzen auszuschließen

Generelle Informationen

1,25(OH)₂ Vitamin D ist die biologisch aktive Form des Vitamin D. 25OH Vitamin D und auch das Vitamin D selbst sind physiologisch inaktiv. 1,25(OH)₂ Vitamin D stimuliert die intestinale Aufnahme von Kalzium und Phosphat. Weiterhin stimuliert es den Knochenabbau als auch -aufbau und verhindert so Rachitis und Osteomalazie. 1,25(OH)₂ Vitamin D ist auch in anderen Geweben (Plazenta, Niere, Brustdrüse,...) und endokrinen Drüsen (Nebenschilddrüse) aktiv verantwortlich für den Kalziumtransport. 1,25(OH)₂ Vitamin D wird schnell weiter metabolisiert. Seine Halbwertszeit im Plasma ist ca. 12 Stunden. Die Metabolite sind entweder 1 alpha-hydroxy-23-carboxytetranorvitamin D, eine Substanz ohne biologische Aktivität, oder per 24-Hydroxylierung das 1,24,25-trihydroxy vitamin D. Diese Substanz hat bei weitem eine geringere biologische Aktivität als das 1,25(OH)₂ Vitamin D. Die Konzentration des 1,25(OH)₂ Vitamin D im Plasma oder Serum is 100- bis 1000-fach niedriger als vom 25OH Vitamin D. Aufgrund seiner geringen Konzentration und des Vorhandenseins ähnlicher Metabolite erfordert die Bestimmung von 1,25(OH)₂ Vitamin D einen Aufreinigungsprozess mittels Extraktion.